El agar Baird-Parker, también conocido como agar yema de huevo, es un medio de cultivo sólido, selectivo y diferencial que se utiliza para la detección y enumeración de *Staphylococcus aureus* en diversas muestras.
Principios del Agar Baird-Parker
Este medio se basa en la capacidad que tiene el *S. aureus* de reducir el telurito y producir lecitinasa, propiedades que generan colonias con características específicas para esta especie.
El hidrolizado pancreático de caseína, el extracto de carne y el extracto de levadura son las fuentes de nutrientes, vitaminas y minerales necesarios para el desarrollo general microbiano. Por otro lado, el piruvato y la glicina son compuestos que favorecen el crecimiento específico de *Staphylococcus aureus*.
El agar Baird-Parker es selectivo porque contiene sustancias que inhiben el crecimiento de la flora acompañante, mientras que favorece el desarrollo de *S. aureus*. Este medio permite diferenciar el *S. aureus* del resto de los estafilococos coagulasa negativos. La yema de huevo, por su parte, proporciona los sustratos para evidenciar la presencia de las enzimas lecitinasa y lipasa.
Características de las Colonias de *Staphylococcus aureus*
Las colonias típicas de *S. aureus* en agar Baird-Parker son negras o grises oscuras, con borde incoloro y un halo claro que las rodea, diferenciándose del resto de microorganismos. La aparición en este agar de colonias negras o grises oscuras brillantes con halo claro alrededor indica la presencia de *S. aureus*.
Si se forma una zona de precipitación, es indicativo de que hay actividad de la lipasa. Es importante tener cuidado de no confundir la presencia de colonias típicas de *S. aureus* con otras. Las colonias de bacterias distintas a *S. aureus* no presentarán estas características. También se pueden observar colonias atípicas de color negro, con o sin borde incoloro, pero sin halo claro. Estas colonias no deben tomarse en cuenta, ya que no corresponden a *S. aureus*.
Staphylococcus aureus: Por qué el Baird Parker te está dando Falsos Negativos, la solución BPMY Agar
Preparación del Agar Baird-Parker
La preparación de este medio de cultivo requiere de varios pasos:
Preparación de la Emulsión de Yema de Huevo
- Se toma un huevo fresco de gallina, se lava bien y se coloca de 2 a 3 horas en alcohol al 70%.
- Luego, el huevo se abre asépticamente y se separa cuidadosamente la clara de la yema.
Preparación de la Solución de Telurito de Potasio al 1%
Algunas casas comerciales venden el telurito de potasio al 1% listo para usar. Para preparar esta solución en el laboratorio, se pesa 1.0 g de telurito de potasio y se disuelve en una parte de agua. Posteriormente, se completa la cantidad de agua hasta llegar a 100 ml.
Preparación del Medio Final
- Pesar 60 g del medio deshidratado y disolver en 940 ml de agua destilada.
- Aplicar calor removiendo el medio frecuentemente para mejorar el proceso de disolución. Dejar hervir por un minuto.
- Dejar reposar hasta que alcance una temperatura de 45 °C y agregar 50 ml de la emulsión de yema de huevo y 10 ml de telurito al 1%.
Es importante destacar que la preparación de la emulsión de yema de huevo y su agregado en el medio es un paso muy vulnerable a la contaminación.
Aplicaciones y Métodos de Siembra
El agar Baird-Parker se utiliza para la enumeración de presuntos *Bacillus cereus* en alimentos y piensos, así como en muestras ambientales y otros materiales.
Siembra de Muestras Clínicas
Antes de sembrar una muestra, se debe esperar a que la placa tome la temperatura del ambiente. Las muestras clínicas se siembran de forma directa descargando parte del material en un extremo de la placa, y a partir de allí se estría por agotamiento.
Siembra de Muestras de Alimentos
- Pesar 10 g de la muestra de alimento y homogeneizar en 90 ml de agua peptonada al 0,1%.
- A partir de allí, se preparan diluciones si es necesario.
- Inocular las placas por triplicado con 0,3 ml de las soluciones preparadas, y sembrar por superficie con espátula de Drigalski.
- Se incuba por 24 a 48 horas a 35-37 °C.
Esta metodología permite realizar el recuento de las colonias típicas obtenidas y es ideal cuando se sospecha la presencia de *S. aureus*.
Enriquecimiento de Muestras
Si se sospecha que la cantidad de *S. aureus* es pequeña o existe mucha flora acompañante, se sugiere enriquecer la muestra en caldo soja tripticasa con 10% de NaCl y 1% de piruvato de sodio. Esto favorecerá el crecimiento de *S. aureus* e inhibirá el desarrollo de la flora acompañante.
Análisis de Muestras de Agua
- En un sistema de filtración al vacío y esterilizado, se filtran 100 ml de agua en estudio.
- Posteriormente, la membrana microporosa de 0,4 micras se retira con una pinza estéril y se coloca sobre una placa de Baird Parker.
- Se incuba por 24 a 48 horas a 35-37 °C.
Esta técnica permite realizar el recuento de colonias típicas de *S. aureus*.
Control de Calidad
El control de calidad en el agar Baird-Parker es crucial para asegurar resultados precisos. Se realiza una prueba de promoción del crecimiento de acuerdo con la versión actual de DIN EN ISO 11133. Se espera que cepas como *S. aureus* ATCC 11778 (WDCM 00001) muestren colonias rosadas con halo de precipitación y una recuperación de al menos el 50%.
Resultados Esperados con Cepa de Referencia
En el caso de las cepas de *S. aureus* ATCC, se sabe que reducen el telurito, y son lipasa y lecitinasa positivas. Para *E. coli* y *P. mirabilis*, se espera que el crecimiento sea inhibido total o parcialmente.
| Cepa Bacteriana | Crecimiento en Medio de Referencia | Recuperación en Medio de Prueba | Características de las Colonias en Agar Baird-Parker |
|---|---|---|---|
| *Bacillus cereus* ATCC 11778 (WDCM 00001) | Colonia contada | ≥ 50 % | Colonias rosadas con halo de precipitación |
| *Bacillus subtilis* ATCC 6633 (WDCM 00003) | Sin límite | N/A | Colonias amarillas sin halo de precipitación |
| *Escherichia coli* ATCC 8739 (WDCM 00012) | N/A | Inhibición total | N/A |
| *Escherichia coli* ATCC 25922 (WDCM 00013) | N/A | Inhibición total | N/A |